Purificación y caracterización de una elagitanasa de Aspergillus niger GH1

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Resumen: El presente trabajo se desarrolló con el objetivo de purificar y caracterizar una elagitanasa de Aspergillus niger GH1. El trabajo incluye cinco etapas experimentales. En la primera etapa los elagitaninos fueron obtenidos a partir de polifenoles totales de cáscara de granada a través de Cromatografía Líquida de Presión Media (MPLC) y se obtuvo punicalagina con alto grado de pureza. Enseguida los elagitaninos fueron biotransformados por la cepa Aspergillus niger GH1 para obtener la enzima elagitanin-acil hidrolasa (EAH) o elagitanasa. Los metabolitos acumulados, incluido el ácido elágico fueron caracterizados por HPLC-MS/MS. Dos compuestos desconocidos derivados de la degradación de punicalagina fueron identificados. La siguiente etapa fue desarrollar una estrategia para la purificación de la enzima con la capacidad de degradar punicalagina y de liberar ácido elágico. Se obtuvieron dos isoformas de la enzima (50 y 70 KDa) y fueron caracterizadas bioquímica y molecularmente. Las enzimas mostraron alta afinidad sobre punicalagina como substrato. Sin embargo, la más alta eficiencia catalítica fue mostrada usando arabinanos de remolacha. Las secuencias de aminoácidos revelaron la presencia de dos isoformas de la enzima α-L-arabinofuranosidasa.

Tesis Pedro Aguilar

 


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