Manuel Alejandro Torres Nágera

Resumen

Solanum elaeagnifolium (trompillo o silverleaf nightshade) es una planta endémica desde el noreste de México y el sudoeste de Estados Unidos. Esta planta en algunos lugares de México se ha utilizado durante décadas en la fabricación de Queso asadero artesanal. La actividad de coagulación de la leche de S. elaeagnifolium ha sido atribuida a aspártico proteasas. El objetivo de este trabajo fue purificar una aspartil proteasa de frutos de S. elaeagnifolium. La purificación se realizó a partir de frutos liofilizados de S. eleagnifolium por la precipitación de sulfato de amonio; la cromatografía de intercambio iónico y cromatografía de afinidad Pepstatina A. El análisis de SDS – PAGE de las proteínas que se eluyeron en la columna de afinidad, muestra solamente una venda de proteína correspondiente a 59 kDa aproximadamente. La identidad de esta banda de proteína como aspartil proteasa fue demostrada por el análisis Western blot utilizando como anticuerpo de conejo primario StAP1 anti-lgG (Solanum tuberosum aspartil proteasa 1). El análisis de cromatografía por filtración en gel (Superosa 12) de la fracción proteica que eluyó de la columna de afinidad demuestra que, la proteína separada SeAP1 es monomérica, puesto que solamente un pico con un peso molecular estimado de 52 kDa aproximadamente, fue detectado. Adicionalmente, se  determinó que, como casi todas las aspartil proteasas monoméricas de plantas, SeAP1 ejerce actividad citotóxica sobre microorganismos patógenos de una manera dosis dependiente. Estos resultados sugieren, nuevas aplicaciones biotecnológicas para SeAP1.

Abstract

Solanum elaeagnifolium (trompillo or silverleaf nightshade) is an endemic plant from the northeast of Mexico and southwest of United States. This plant in some places of Mexico has been used for decades in the manufacture of artisanal asadero cheese. The milk-clotting activity of S. elaeagnifolium has been attributed to aspartic proteases. The aim of this work was to purify an aspartic protease from fruits of S. elaeagnifolium. Purification was performed from lyophilized fruits of S. eleagnifolium by ammonium sulfate precipitation; ion exchange chromatography and Pepstatin A affinity chromatography. SDS- PAGE analysis of proteins eluted from the affinity column shown only one protein band corresponding to 59 kDa. approximately. Identity of this protein band as aspartic protease was demonstrated by Western blot analysis using as primary antibody rabbit IgG-anti StAP1 (Solanum tuberosum aspartic protease 1). Chromatographic analysis by gel filtration (Superose 12) ofthe protein fraction eluted from the affinity column demonstrate that, isolated SeAP1 is monomeric, since only one peak with an estimated molecular weight of 52 kDa approximately, was detected. Additionally, we determined that, like almost monomerics plant APs, SeAP1 exerts cytotoxic activity towards plant pathogens a dose- dependent manner. These results suggest new biotechnological applications for SeAPs.

OBTENCIÓN DE UN COMPLEJO ENZIMÁTICO CON ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DEL FRUTO DE Solanum elaeagnifolium