Gen que codifica para la invertasa de Aspergillus niger GH1 y producción de la enzima en Pichia pastoris a través de un gen sintético

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Resumen: Las β-fructofuranosidasas o invertasas (EC 3.2.1.26) son enzimas ampliamente usadas en la industria alimentaria, donde la fructosa es preferible sobre la sacarosa, debido a que es más dulce y no cristaliza fácilmente. La cepa xerófilica Aspergillus niger GH1, fue aislada del semi-desierto mexicano, y se ha reportado como un productor de la invertasa. En este trabajo, se describe el gen y la secuencia aminoacídica de la invertasa de A. niger GH1, y el uso de un gen sintético para producir la enzima en la levadura metilotrófica Pichia pastoris. Además, la invertasa producida se caracterizó bioquímicamente. La secuencia del gen de la invertasa mostró una longitud de 1770 pares de bases sin intrones, codificando para una proteína de 589 aminoácidos, y presentó una identidad de 93% y 97% con invertasas de A. kawachi IFO 4308 y de A. niger B60, respectivamente. Un cultivo de 4,2 L con la cepa de P. pastoris recombinante construida mostró una producción de invertasa extracelular y periplásmica a las 72 h de inducción de 498 y 3776 unidades de invertasa (U), respectivamente, que corresponde a 1018 U/L de medio de cultivo. La invertasa producida mostró un pH óptimo de 5,0, la temperatura óptima de 60ºC, y la actividad específica de 3389 U/mg de proteína, y después de almacenamiento durante 96 horas a 4°C mostró 93,7 % de su actividad. Esta invertasa podría ser adecuada para la producción de azúcar invertido utilizado en la industria alimentaria.

Tesis Fabiola Veana

 


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